В медицинской лаборатории риск контаминации клеточных культур не поддается исчислению – какой бы кропотливой ни была работа. Конечно, нередки случаи неправильного расчета рисков, а заражение часто приводит к потере культуры. Поэтому в этом блоге мы хотели бы пролить свет на то, как систематически выявлять и избегать контаминации клеточных линий.
Каждая медицинская лаборатория находится под угрозой изо дня в день
Микробное загрязнение клеточных культур, в том числе приобретенных у третьих лиц, не редкость в лабораториях. На самом деле все наоборот: многие клеточные линии, выращенные в лаборатории, заражены микоплазмой. Крошечные грибковые споры распространены повсеместно и могут распространяться по воздуху. Конечно, при работе в стерильной среде возможны человеческие ошибки. Легко сделать ошибку.
Ужасные сценарии в лабораториях клеточных культур – контаминация всех типов:
микробная контаминация (бактерии, микоплазма, грибки, дрожжи и т. д.)
вирусная контаминация
белковая контаминация (прионы)
химическая контаминация (вымываемые и экстрагируемые вещества из пластика, тяжелые металлы и т.
д.
) контаминация другими культурами клеток
Откуда берется загрязнение?
1. Насколько «чиста» исходная культура?
Проблемы часто начинаются с исходного материала. Даже при всех возможных усилиях в производстве сред некоторые материалы невозможно сделать полностью стерильными. Поэтому всегда существует риск выхода микоплазмы из стерильного фильтра. Прионы могут выжить даже при стерилизации паром при температуре 121 °C.
2. Действительно ли рабочая лаборатория представляет собой стерильную среду?
Одной из основных причин лабораторного загрязнения является человеческий организм. Например, многих случаев перекрестного загрязнения можно было бы избежать, если бы лаборанты не работали с несколькими производственными линиями одновременно на стерильном столе. Одна культура может быстро заразить другую, если с жидкостью не обращаться должным образом.
Кроме того, спешка — злейший враг скучной работы. Дверь лабораторного инкубатора нельзя открывать без причины и, конечно же, нельзя оставлять открытой надолго. Независимо от того, насколько цейтнот они могут испытывать, лаборанты должны работать только с одной клеточной линией за раз. При распаковке одноразовых пипеток под столом после отвинчивания колпачок необходимо отложить в сторону.
3. Используете ли вы подходящее лабораторное оборудование?
Конечно, даже оборудование, используемое в медицинских лабораториях, вполне может вызвать заражение клеточной культуры. Поэтому мы рекомендуем:
Использовать пластиковые контейнеры
, не содержащие пластификаторов.
Выбрать подходящее место для инкубатора (расположение рядом с умывальником может привести к загрязнению мылом).
Используйте аксессуары для инкубаторов из стерилизованной меди.
При использовании антибиотиков следует время от времени разводить линии без антибиотиков. (Это связано с тем, что антибиотики могут маскировать загрязнение, и инфекция может распространяться.)
Какие методы исследования можно использовать для отслеживания инфекций?
Одна из самых опасных вещей, связанных с микоплазменными инфекциями, заключается в том, что они часто остаются незамеченными в течение длительного времени. В принципе, случаи загрязнения можно контролировать и отслеживать с помощью различных методов, некоторые из которых являются очень сложными, а другие — менее сложными.
Опытный лаборант может определить, произошло ли перекрестное загрязнение, просто посмотрев под микроскопом.
Если мы извлечем всю ДНК из клеточной культуры, метод ПЦР можно использовать для обнаружения содержания ДНК микоплазмы.
Лаборатории, выполняющие трансдукцию вируса или биологические анализы, также должны проверять наличие вирусного загрязнения.
Лаборатории, производящие препараты для новых терапевтических средств, должны проверять на низкий риск заражения бактериями, спорами, грибками, микоплазмами, ВИЧ, ВГС и ГЭКРС.
Как бороться с загрязнением?
Каждый случай загрязнения должен быть задокументирован и классифицирован. По крайней мере, медицинские лаборатории, которые скрывают проблемы загрязнения окружающей среды, ставят под угрозу свою хорошую репутацию.
Конечно, в случае загрязнения также необходимо принимать специальные меры по очистке: в случае грибковых инфекций рекомендуется проверять, чтобы лаборатория регулярно дезинфицировалась средством на спиртовой основе
. внутренняя часть
научного инкубатора с раствором на спиртовой основе помогает избежать заражения
Ежемесячная стерилизация горячим воздухом является стандартной медицинской практикой во многих лабораториях
. Для чувствительных стволовых клеток только в редких случаях инфицированные клеточные линии можно лечить антибиотиками. В большинстве случаев решение дорогое - приходится утилизировать культуру и начинать работу с нуля
. В заключение:
Возможность постоянно обнаруживать, подтверждать и устранять загрязнения абсолютно необходима, особенно в медицинских лабораториях, которые работают с высокочувствительными стволовыми клетками и не используют антибиотики. Необходим прозрачный мониторинг. Сокрытие загрязнения или допущение его распространения только увеличивает опасность и в этом нет необходимости. Инкубатор с
постоянной температурой всегда должен быть самым безопасным компонентом всего этапа процесса; если образец загрязнен, то в большинстве случаев это происходит либо до, либо после культивирования
в
охлаждающем инкубаторе .